L’Opera svolgeva la sua attività nelle parrocchie, alla dipendenza dei parroci, con una organizzazione capillare. «Assegnare in ogni vicoletto o contrada le varie fanciulle che hanno a sorvegliarsi, ad una o due di queste giovinette, a cui si dà il nome di assistenti: mettere ognuna delle assistenti, o meglio entrambe, sotto una così detta sorvegliatrice, che, maggiore ad esse o per età o per condizione, possa dirigerle all’uopo col consiglio, e coll’autorità sostenerle; sottoporre, per l’uniforme andamento dell’Opera, le diverse sorvegliatrici d’una Parrocchia alla sovrintendenza d’una così detta anziana o superiora della compagnia, e nei paesi o città grandi, che constano di più Parrocchie, tutte le anziane alla sovrintendenza di una sopra sorvegliatrice o superiora generale delle diverse compagnie: ecco la facile e ben intesa organizzazione della Pia Opera»: Annali della Pia Opera, cit., n. 1, vol. I, p. 10.